01 什么是酶聯(lián)免疫吸附測定？

酶聯(lián)免疫吸附測定（Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay，ELISA），是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù)。自上世紀(jì)70年代初問世以來，發(fā)展迅速。 

ELISA是基于抗原-抗體的特異性結(jié)合反應(yīng)建立起來的一種快速檢測技術(shù)， 它將酶促反應(yīng)的高效率和免疫反應(yīng)的高度專一性有機(jī)地結(jié)合起來，可對各種微量有機(jī)物含量進(jìn)行測定。 

抗原、抗體小知識(shí)

抗原決定簇示意圖

抗原是能在機(jī)體中引起特異性免疫應(yīng)答的物質(zhì)?？乖M(jìn)入機(jī)體后，可刺激機(jī)體引起細(xì)胞免疫和產(chǎn)生抗體。抗原的反應(yīng)性取決于抗原決定簇。一個(gè)抗原分子可帶有不同的決定簇。

抗原抗體結(jié)合反應(yīng)示意圖

抗體是指能與抗原特異性結(jié)合的免疫球蛋白。

抗原抗體的關(guān)系就如同特定的鑰匙和鎖，一一對應(yīng)，只有找到正確的鑰匙--抗原才能打開對應(yīng)的鎖---抗體。

02 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)原理

1、使抗原或抗體結(jié)合在固相載體表面，并保持活性。

2、使抗體或抗原與某種酶連接成酶標(biāo)記抗體或抗原。

3、在測定時(shí)，把受檢抗體（或抗原）和酶標(biāo)抗原（或抗體）按不同步驟與固相載體表面的抗原（或抗體）一起反應(yīng)。

4、采用洗滌的方法去除未結(jié)合的酶標(biāo)抗原（或抗體），最后結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。

5、加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化變?yōu)?/span>有色產(chǎn)物。

6、產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，可以根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺來進(jìn)行定性或者定量分析。

03 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)分類

 間接法（Indirect ELISA)：

將已知抗原吸附于固相載體，酶標(biāo)記二抗

檢測待測液體中未知抗體

雙抗體夾心法（Sandwich ELISA）：

將已知抗體吸附于固相載體，酶標(biāo)記一抗

檢測待測液體中的可溶性抗原

競爭法（Competitive ELISA）：

將已知抗體或抗原吸附于固相載體，酶標(biāo)記抗原或抗體

檢測待測液體中的可溶性抗原或抗體

04 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的優(yōu)勢

1、檢測速度快：可以制備成相應(yīng)檢測試劑盒，多樣品同時(shí)檢測，大大縮短檢測時(shí)間。

2、特異性強(qiáng)：其利用抗原與抗體的特異性結(jié)合測定，具有選擇性高的特點(diǎn)。

3、靈敏度高：結(jié)果的準(zhǔn)確性和方法的靈敏度與儀器分析方法一致。

4、操作簡單：不需要大型儀器設(shè)備，試劑盒可以直接處理，不需要二次加工。

5、便于推廣：對試驗(yàn)人員的技術(shù)要求不高，便于技術(shù)推廣。

05 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的應(yīng)用

由于酶聯(lián)免疫法具有快速、操作方便、靈敏度高的特點(diǎn)，適用于現(xiàn)場檢測，其應(yīng)用范圍也在不斷擴(kuò)大，目前已被廣泛應(yīng)用于食品檢測和醫(yī)學(xué)檢測中。在食品檢測中主要用于檢測植物性食品的農(nóng)藥殘留、動(dòng)物性食品的獸藥殘留、真菌毒素、食源性微生物及食品中特殊蛋白質(zhì)、重金屬等。